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【PDF】分子生物學常用實驗方法 - 醫(yī)學資源下載
資源作者：醫(yī)璐冇伱
資源分類：醫(yī)學 - 基礎醫(yī)學
資源屬性：電子書
資源售價：3 愛醫(yī)幣
資源大小：10.78M
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下載人數(shù)：13人
上傳日期：2012-11-18 14:38:58

【pdf】分子生物學常用實驗方法 全文目錄 第一章 質(zhì)粒的制備 一、培養(yǎng)基的制備 第一節(jié) 細菌的培養(yǎng)和保存 目錄 第二節(jié) 細菌感受態(tài)的制備和質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化 二、液體細菌培養(yǎng) 三、固體細菌培養(yǎng) 四、菌種的保存與復蘇 第三節(jié) 質(zhì)粒的提取和純化 二、細菌的轉(zhuǎn)化 一、感受態(tài)細胞的制備 一、質(zhì)粒的小量提取 二、質(zhì)粒的大量提取（堿裂解法） 第二章 DNA的限制性內(nèi)切酶酶切技術 第一節(jié) 限制性內(nèi)切酶的特性和反應條件 二、限制性內(nèi)切酶的命名 三、分類 一、限制性內(nèi)切酶的來源 六、限制酶的反應條件 四、限制酶的特性 五、酶活力單位的定義及酶的貯存 第二節(jié) 限制性內(nèi)切酶的應用方法 二、大量酶解反應 三、雙酶解反應 一、小量酶解反應 四、酶解產(chǎn)物的鑒定 第三章 DNA重組體的構建 第一節(jié) DNA重組的方法 一、粘端連接法 二、平端連接法 三、平-粘連接法 第二節(jié) DNA重組反應 二、平端連接反應方法 三、定向連接反應 一、粘端連接反應方法 第三節(jié) 重組質(zhì)粒的鑒定 一、a互補 二、插入失活 三、菌落原位雜交 四、限制酶酶切分析 第四章 DNA序列測定 第一節(jié) Sanger雙脫氧鏈終止法的原理及試劑 二、試劑 一、原理 第二節(jié) 聚丙烯酰胺測序凝膠的制備 一、測序板的處理與安裝 第三節(jié) 測序樣品的制備反應與高壓電泳 二、測序凝膠的灌制 一、應用T7測序試劑盒的測序反應方法 二、引物末端標記法 第四節(jié) 測序凝膠的放射自顯影與序列的讀取 二、DNA序列的讀取 一、放射自顯影 第五章 核酸探針的制備和標記 第一節(jié) 核酸探針的基本概念和種類 二、探針的種類及選擇 三、各類標記物及選擇 一、基本概念 第二節(jié) DNA探針的制備和標記 一、切口平移法 二、隨機引物法 三、單鏈DNA探針的制備和標記 四、DNA探針的末端標記 第三節(jié) RNA探針的制備和標記 一、SP6/T7RNA聚合酶體外轉(zhuǎn)錄的原理 二、RNA探針制備方法 第四節(jié) 寡核苷酸探針的制備和標記 第五節(jié) 探針的純化和比放射性活性測定 一、探針的純化 第六節(jié) 非同位素法標記核酸探針 二、探針的比放射性活性測定 一、地高辛標記法 二、光敏生物素法 第六章 DNA的凝膠電泳 第一節(jié) 瓊脂糖凝膠電泳 一、瓊脂糖凝膠的性質(zhì) 二、電泳裝置 三、電泳緩沖液 四、凝膠濃度的選擇 五、常規(guī)瓊脂糖凝膠電泳 六、堿性瓊脂糖凝膠電泳 第二節(jié) 聚丙烯酰胺凝膠DNA電泳 一、非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 二、變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 第三節(jié) 從凝膠中回收和純化DNA 一、DNA的回收 二、回收DNA的純化（DEAE-sephacel柱層析法） 第七章 真核細胞總RNA的制備與分析 第一節(jié) RNA的制備 一、培養(yǎng)細胞總RNA制備 二、組織RNA的制備（并硫氰酰胍法） 三、Poly(A)+RNA的純化（寡聚dT）纖維素純化mRNA 四、分級分離RNA 第二節(jié) RNA的分析 一、NorthernBlot雜交 二、RNA的狹線雜交 第八章 細胞及組織DNA的制備和SouthernBlot分析 第一節(jié) 真核基因組DNA的制備 一、細胞基因組DNA的提取 二、組織細胞基因組DNA的提取 三、DNA的純化、定量和濃縮 第二節(jié) DNA印跡轉(zhuǎn)移雜交技術 一、瓊脂糖凝膠電泳分離基因組DNA限制性酶切片段 二、DNA的轉(zhuǎn)移與固定 三、預雜交和雜交 第三節(jié) 放射自顯影和顯色反應 一、放射自顯影 二、非同位素探針雜交的檢測 第九章 克隆化基因的表達與蛋白產(chǎn)物的檢測 第一節(jié) 原核表達系統(tǒng)的理論基礎 一、原核細胞的分子生物學特點及表達調(diào)控因素 二、外源基因的克隆與重組 三、外源基因的蛋白表達方式 第二節(jié) 克隆化基因產(chǎn)物的檢測與分析 二、大腸桿菌包涵體的分離與蛋白純化 一、外源基因的誘導表達 三、蛋白質(zhì)的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳技術 四、Western印跡法檢測表達蛋白 第十章 生長因子的常用檢測方法 第一節(jié) 生長因子的定性檢測 第二節(jié) 生長因子的定量檢測 一、免疫沉淀法檢測表達蛋白 二、ELISA法 第三節(jié) 生長因子活性檢測 二、MTT比色法 一、3H-TdR摻入法 第十一章 聚合酶鏈反應技術 第一節(jié) PCR的原理與基本操作 二、基本操作 一、PCR的原理 第二節(jié) PCR反應體系中的各種組分 一、引物 二、DNA聚合酶 三、PCR反應緩沖液 第三節(jié) PCR反應模板的制備 二、全血標本DNA制備 四、dNTPs 一、細菌DNA的制備 三、從白細胞中制備DNA 四、臨床拭子標本DNA的提取 五、固定和包埋的組織標本DNA提取 八、RNA標本的制備 六、絨毛及羊水細胞DNA的提取 七、由微量及特殊標本中制備染色體DNA 第四節(jié) PCR反應條件的優(yōu)化 一、溫度循環(huán)參數(shù) 二、PCR產(chǎn)物積累規(guī)律 三、手工操作和自動化 四、預防假陽性結果 第五節(jié) PCR擴增產(chǎn)物的分析 一、凝膠電泳分析法 二、點雜交 三、微孔板雜交法 第六節(jié) PCR相關技術及其應用 四、PCR-ELISA法 一、PCR引物的5’端修飾 二、應用PCR制備探針 三、PCR克隆 四、原位PCR 五、逆轉(zhuǎn)錄PCR 六、其它幾種PCR相關技術 第十二章 原位雜交技術 第一節(jié) 原位雜交技術基礎程序 一、玻片的預處理 二、組織取材與固定劑的選擇 三、組織切片的處理 四、雜交反應 五、雜交后處理 六、雜交體的檢測 七、對照實驗和ISHH結果的判斷 八、原位雜交基本操作步驟 第二節(jié) 組織細胞原位雜交技術 一、細胞和組織片制作 二、預雜交和雜交 三、雜交后處理 四、顯示系統(tǒng) 第三節(jié) 染色體原位雜交技術 一、染色體的制備 二、原位雜交 三、信號檢測 四、顯帶復制 第四節(jié) 原位雜交結合免疫組織化學技術 二、非同位素原位雜交與免疫組化聯(lián)合法 一、同位素原位雜交與免疫組化PAP法聯(lián)合程序 第五節(jié) 雙重標記原位雜交技術 二、結合放射性同位素和非放射性標記探針的雙重標記原位雜交 一、兩種同位素標記探針的雙重標記原位雜交 三、非放射性標記探針的雙重標記原位雜交 第六節(jié) 電鏡原位雜交技術 第七節(jié) PCR與原位雜交細胞化學結合法 第八節(jié) 原位引物延伸標記法 第十三章 真核細胞基因轉(zhuǎn)染技術 第一節(jié) 細胞培養(yǎng)基本技術 一、培養(yǎng)基制備 第二節(jié) 細胞轉(zhuǎn)染方法 二、細胞凍存 三、細胞復蘇 一、轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的制備 二、磷酸鈣介導轉(zhuǎn)染法 三、DEAE葡聚糖介導轉(zhuǎn)染法 四、電擊基因?qū)敕? 五、脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染法 第三節(jié) 轉(zhuǎn)染細胞的篩選 一、G418篩選 二、克隆細胞株的轉(zhuǎn)移與擴增 第十四章 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒的包裝與克隆篩選 第一節(jié) 重組逆轉(zhuǎn)錄病毒的包裝 一、包裝細胞的來源與特性 二、目的基因的導入與包裝 三、重組逆轉(zhuǎn)錄病毒液的制備 第二節(jié) 病毒滴度的測定 二、病毒滴度測定與計算 四、病毒液的濃縮與保存 一、NIH3T3細胞的培養(yǎng)與準備 第三節(jié) 野生型病毒的檢測 二、RT-PCR檢測 三、S+/L-檢測法 四、neo基因及β-半乳糖苷酶（β-gal）互補分析法 一、PCR檢測 第四節(jié) 逆轉(zhuǎn)錄病毒介導的體外基因轉(zhuǎn)移方法 二、常用靶細胞 一、靶細胞的選擇條件 三、腫瘤浸潤淋巴細胞的分離和培養(yǎng) 四、病毒感染靶細胞 第十五章 程序化細胞死亡常用研究方法 第一節(jié) 基本概念 一、PCD的形態(tài)學特征 二、PCD的生化特性 第二節(jié) 形態(tài)學觀察方法 一、普通光鏡觀察方法 二、活細胞懸液熒光染色法 附：超薄切片常規(guī)光鏡觀察制備方法 三、透射電鏡觀察法 第三節(jié) 瓊脂糖凝膠電泳法 一、常規(guī)法 第四節(jié) 流式細胞儀觀察法 二、快速法 一、PI染色法 二、Hoechst-PI染色方法 第五節(jié) 末端標記法 一、簡易末端標記法 二、5’末端32P標記法 三、原位末端標記法 第十六章 分子生物學實驗室常用儀器的使用方法與保養(yǎng) 第一節(jié) PCR擴增儀 第二節(jié) 冷凍離心機 第三節(jié) 紫外檢測儀 第四節(jié) 數(shù)字式酸度計 第五節(jié) 分光光度計 第六節(jié) 電泳儀 第七節(jié) 分析天平 附錄二常用緩沖液和儲存液的濃度及配制方法 附錄一常用實驗用品的處理 附錄三常用試劑的配制 附錄四常用單位的換算 附錄五常用的同位素及標記化合物 附錄六放射性自顯影試劑、器材及檢測 附錄七國內(nèi)主要生物技術公司及試驗儀器生產(chǎn)廠家

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